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專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
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產(chǎn)品型號：BC1965-100T/48S
更新時間：2024-04-10
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1572
010-50973130
產(chǎn)品分類
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微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1965
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體3 mL×1瓶 | 常溫保存 |
溶液的配制：
試劑二：臨用前取1瓶加7.5 mL試劑一溶解，現(xiàn)用現(xiàn)配，并且盡快使用，用不完的試劑2-8℃可保存一周；若試劑變色則不能使用。
試劑三：若有白色物質(zhì)析出，放于37℃中溶解即可。
產(chǎn)品說明：
土壤漆酶（SL）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應(yīng)用。
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠大于底物ABTS，測定ABTS自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋、可調(diào)式移液器、震蕩儀、研缽、30-50目篩。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
二、測定步驟
分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到420nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。
加樣表：
| 試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
| 土樣（g） | 0.03 | 0.03 |
| 試劑一（μL） | 135 | 135 |
| 試劑二（μL） | 150 | - |
| 置于37℃水浴鍋或37℃恒溫培養(yǎng)箱準(zhǔn)確反應(yīng)10min。 | ||
| 試劑三（μL） | 15 | 15 |
| 試劑二（μL） | - | 150 |
| 4℃，12000g 離心15min，取200μL上清于420nm測定其吸光值，分別記為A測定管、A對照管，計算ΔA測定=A測定管-A對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。 | ||
注意事項：
測定之前進行預(yù)實驗，若吸光值較高（A>1.5），請減少土樣質(zhì)量再進行測定。若數(shù)值偏小可以延長反應(yīng)時間或增加土樣質(zhì)量進行測定。計算時注意相對應(yīng)修改計算公式。
離心后若上清仍然渾濁，可再次離心去除。
實驗實例：
稱取兩份0.03g三葉草土于1.5mLEP管中，分別為測定管及對照管，之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.421-0.23=0.191，按土樣質(zhì)量計算酶活得：
SL活性（U/g土樣）=1.39×ΔA測定÷W= 1.39×0.191÷0.03=8.84 U/g 土樣。
稱取兩份0.03g林土樣于1.5mLEP管中，分別為測定管及對照管，之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=1.009-0.463=0.546，按土樣質(zhì)量計算酶活得：
SL活性（U/g土樣）=1.39×ΔA測定÷W= 1.39×0.546÷0.03=25.30 U/g 土樣。
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